Jennifer nasceu na Califórnia, mas cresceu em Nova York [1]. É filha do ator John Aniston e da atriz Nancy Dow [2], seus pais se separaram quando Jennifer tinha nove anos. Seu pai é greco-americano, e nasceu na ilha de Creta, na Grécia, enquanto sua mãe é de descendência ítala-escocêsa e nasceu em Nova York [3]. Aniston tem dois meio-irmãos, John Melick e Alex Aniston [1][2]. Seu padrinho foi o famoso ator e melhor amigo de seu pai Telly Savalas [1][2]. Jennifer viveu na Grécia por um ano, durante a infância com sua família, e mais tarde se mudou para Nova York [2]. Seu pai, apareceu em algumas séries de TV como Love of Life, Search for Tomorrow e Days of Our Lives [2] - conhecidentemente na série Friends, o personagem Joey Tribbiani, interpretado pelo ator Matt LeBlanc, fazia parte de uma série de TV chamada Days of Our Lives. Aos onze anos, Aniston frequentou a renomada escola Rudolf Steiner School em Nova York [4], além de despertar em Jennifer a vontade em atuar, a escola também lhe despertou a paixão pela pintura. Graduou-se na Fiorello H. LaGuardia High School of Music & Art and Performing Arts em Manhattan [1]. Em 1987, após se formar, conseguiu papéis em algumas peças da Off-Broadway como For Dear Life e Dancing on Checker's Grave [2]. Teve vários empregos de tempo parcial, trabalhando como operadora de telemarketing, garçonete e mensageira [2]. Em 1989, se mudou para Los Angeles [5].
Depois de se envolver com a co-estrela de Ferris Bueller, Charlie Schlatter, em 1990, Jennifer iniciou um relacionamento com Daniel MacDonald, em 1991, que continuou até 1994, pouco antes dela entrar no elenco de Friends [6]. Brevemente namorou o músico Adam Duritz entre 1995 e 1998, Jennifer também se envolveu com o ator Tate Donovan, [6] o casal chegou a ficar noivo.
Em 1998, começou a namorar o ator Brad Pitt, eles se casaram em 29 de julho de 2000, em Malibu [7]. Por alguns anos, o casamento foi considerado um raro sucesso em Hollywood [2]. No entanto, o casal anunciou sua separação em 6 de janeiro de 2005 [8]. Pitt se envolveu com a atriz Angelina Jolie, muito embora ele tenha negado ter sido este o motivo da separação. Dois meses depois da separação, Pitt, Aniston e alguns amigos do casal foram vistos juntos publicamente, num jantar em comemoração ao aniversário dela, eles que não se falavam desde o fim do casamento, se reconciliaram [9]. Aniston, no entanto, pediu o divórcio em março de 2005 [10] o que foi oficializado em outubro de 2005. Especulações davam como certo que a separação foi devido à recusa de Aniston em ter filhos com Brad. Aniston negou que esta tenha sido a causa de sua separação. Em agosto de 2005 numa entrevista à Vanity Fair, ela afirmou que, "sempre quis ter filhos e nunca iria abandonar essa experiência por uma carreira".
Jennifer revelou que o seu divórcio levou-a a aproximar-se da sua mãe, Nancy, de quem estava afastada há quase uma década. Elas inicialmente se afastaram quando Nancy falou sobre sua filha em um programa de TV e mais tarde escreveu um livro intitulado "From Mother and Daughter to Friends: A Memoir" (1999) [11][12].
Depois de seu divórcio, Aniston começou a namorar com o ator Vince Vaughn, com quem co-estrelou em Separados Pelo Casamento, mas problemas no namoro foram noticiados em setembro de 2006, seguido de uma separação confirmada em dezembro do mesmo ano [6]. Ela brevemente namorou o modelo Paul Sculfor por alguns meses e em fevereiro de 2008, começou a namorar o cantor John Mayer [6]. O casal se separou em agosto, mas retomou o relacionamento em outubro, antes de se separar novamente em março de 2009.
Aniston fez duas septoplastias para corrigir um desvio de septo, a primeira foi feita incorretamente em 1994 e a segunda em janeiro de 2007. Septoplastia é uma operação cirúrgica que ajuda a aliviar uma condição comum que pode levar a dificuldades respiratórias e problemas para dormir [13]. Jennifer é madrinha de Coco Riley Arquette, a filha de seus bons amigos, atores Courteney Cox e David Arquette.
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